一、使用在线过滤器

我深信在线过滤器是HPLC或UHPLC仪器上有经济效益的部件。在线过滤器放置在自动进样器和色谱柱（或是保护柱）之间，常用的在线过滤器分为含有可替换筛板（0.5 μm或0.2 μm）的不锈钢在线过滤器以及一次性的PEEK材质的在线过滤器，一般必须选择比柱筛板孔径更小的筛板，这样才能有效拦截可能堵塞色谱柱筛板的颗粒。一旦发现仪器的压力开始增加，可能在线过滤器筛板开始堵塞了，我们必须在其被堵塞更新。

在线过滤器的功能就如同使用滤膜一样，但是不需要任何额外的工作。使用离心机处理样品后，还是有可能会有少许的颗粒进入仪器，而位在色谱柱面的在线滤器就可以将残留颗粒拦截下来。此外在线滤器的好处是简单易换，一般只需要5分钟就可以换好，就可以重新开机使用，也不需要花时间重新调节或是校正。另外一个好处就是在线过滤器也可以过滤掉仪器中一些零配件老化耗损所产生的颗粒。我是非常的主张每台液相仪器都装配在线过滤器，即使使用保护柱，我也建议在保护柱加装在线过滤器。

二、使用保护柱

保护柱可以简单的说是装在色谱柱面的一支短的色谱柱。一般是1-2 cm长，装的填料和使用的色谱柱填料相匹配，而使用的筛板孔径不会比色谱柱中使用的筛板孔径大。保护柱有两种功能：（1）可以阻挡可能堵塞色谱柱的颗粒；（2）因为保护柱和色谱柱填料相匹配，任何可能和色谱柱填料产生不可逆作用而不出峰的化学杂质，会被保护柱先行捕获。

使用保护柱绝对可以延长色谱柱的寿命。但是考虑是否使用保护柱，建议评估以下几点：

（1）保护柱也不便宜，所以要考虑购买保护柱的费用是否能由所增加的色谱柱寿命补偿回来；

（2）保护柱的寿命有多长？必须注意何时需要换保护柱芯，不要因为更换太晚而污染到色谱柱；

（3）如何冲洗保护柱？冲洗时需要将保护柱和色谱柱分开冲洗，以免将累积在保护柱内的不纯物冲洗到色谱柱中；

（4）不要期望因为加了1-2 cm的保护柱而会增加柱效。装上保护柱虽然类似增加柱长，但是使用保护柱也增加了两个接头和连接管路，这些会造成仪器系统柱效减少，因此如果能维持不装保护柱时的柱效就不错了。

毋庸赘言，使用保护柱肯定可以延长色谱柱的寿命，但是建议每个实验室在经济效益和工作量方面来评估是否需要使用保护柱。即使使用保护柱，我也会建议在保护柱和自动进样器之间装个在线滤器，毕竟更换在线滤器比更换保护柱便宜，也可以同时增加保护柱和色谱柱的寿命。

三、不进未处理的样品

不管有没有使用处理，建议所有的样品在进样经过过滤或是离心处理。例如当样品经过滤膜可以滤除颗粒从而减少堵塞色谱柱的筛板，滤膜的孔隙大小必须小于色谱柱的筛板孔径大小。一般大于3 μm颗粒的色谱柱使用2 μm大小的筛板，3 μm颗粒的色谱柱则使用0.5 μm的筛板，而小于3 μm颗粒的色谱柱一般使用0.2 μm的筛板，因此通用的0.45 μm的滤膜基本可以用在除了亚2 μm颗粒以外所有的色谱柱；对于亚2 μm颗粒的色谱柱，一般使用0.2 μm大小孔隙的滤膜。大多滤膜是事先封装好，可以直接接在注射器进行过滤或是作为96孔板的过滤板。

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